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【经验交流】临床检验样本制备常用抗凝剂的特点及正确选择应用
发布者:CN    发布于:2015-05-29

编辑:李晓兰

【摘要】在实验室检验中,有许多检测项目的血液标本是需要抗凝才可以检测的。本文主要注重介绍几种常用抗凝剂的特点及其在实际中的应用。

【关键词】特点;应用;抗凝剂;

引言

    在血液学检验中,有许多项目的血标本是需要抗凝剂的,但抗凝剂种类很多。抗凝剂的选择是根据实验项目确定的,不同的抗凝剂性质各异,对血液成分有不同的影响,因此必须依检验目的而适当选择,才能获得预期的结果。临床检验常用的抗凝剂有EDTA、肝素、枸橼酸钠以及草酸盐等4种,现将它们的特点及应用分别叙述如下。

肝素

    肝素抗凝是用于血液化学成分检测的首选抗凝剂。肝素是一种含有硫酸基团的粘多糖,是分散相物质平均分子质量为15000。其抗凝原理主要是通过与抗凝血酶结合引起抗凝血酶构型发生变化,加速凝血酶-凝血酶复合体形成而产生抗凝作用。此外,肝素还能借助血浆辅助因子(肝素辅助因子)来抑制凝血酶。常用肝素抗凝剂是肝素的钠、钾、锂、铵盐,其中以肝素锂最好,但其价格较贵,钠、钾盐会增加血液中的钠、钾含量,铵盐会增加尿素氮的含量。通常用肝素抗凝的剂量为10.012.5 IU/ml血液。

    肝素对血液成分干扰较少,不影响红细胞体积,不引起溶血,适用于做红细胞渗透性试验、血气、血浆渗透量、红细胞压积及普通生化测定。但肝素具有抗凝血酶作用,不适合做血凝试验。另外,肝素过量可引起白细胞聚集和血小板减少,所以不适合做白细胞分类和血小板计数,更不能用于止血检验。此外,肝素抗凝血不能用于制作血涂片,因为Wright染色后出现深蓝色背景,影响显微镜减产。肝素抗凝血应于短时间内使用,否则放置过久血液又可凝固。 

乙二胺四乙酸盐(EDTA)

    EDTA能与血液中Ca2+结合成螯合物,凝血过程被阻断,血液不能发生凝固。EDTA盐有钾、钠、锂盐,国际血液学标准化委员会推荐使用的是EDTA-K2,其溶解度最高,抗凝速度最快。EDTA盐通常配成质量分数是15%的水溶液,每ml血液加1.2mgEDTA,即每5ml血液加0.04ml 15%EDTA溶液。EDTA盐可在100℃下干燥,抗凝作用不变。

    此抗凝剂不影响白细胞计数及大小,对红细胞形态影响最小,并且可以抑制血小板的聚集,适用于一般血液学检测。但如果抗凝剂浓度过高,渗透压上升,会造成细胞皱缩。EDTA溶液pH与盐类关系较大,低pH可使细胞膨胀。EDTA-K2可使红细胞体积轻度膨胀,采血后短时间内平均血小板体积非常不稳定半小时后趋于稳定。EDTA-K2使Ca2+Mg2+下降,同时使肌酸激酶、碱性磷酸酶降低,EDTA-K2的最佳浓度为1.5mg/ml血液,如果血少,中性粒细胞会肿胀分叶消失,血小板会肿胀、崩解,产生正常血小板的碎片,使分析结果产生错误。EDTA由于能抑制或干涉纤维蛋白凝块形成时纤维蛋白单体的聚合,不适于血凝和血小板功能检测,也不适用于钙、钾、钠及含氮物质的测定。此外,EDTA能影响某些酶的活性和抑制红斑狼疮因子,故不适合制作组化染色和检查红斑狼疮细胞的血涂片。

枸橼酸盐 

    枸橼酸盐主要是枸橼酸钠,其抗凝原理是能与血液中的Ca2+结合形成螯合物,使Ca2+失去凝血功能,凝血过程被阻断,从而阻止血液凝固。枸橼酸钠有Na3C6H5O7·2H2O2Na3C6H5O7·11H2O两种晶体,通常用前者配成3.8%3.2%的水溶液,与血液按照1:9体积混合。

大部分凝血试验都可用枸橼酸钠抗凝,它有助于因子和因子的稳定,并且对平均血小板体积及其他凝血因子影响较小,可用于血小板功能分析。枸橼酸钠细胞毒性较小,也是输血中血液保养液的成分之一。但是,枸橼酸钠6mg才能抗凝1ml血液,碱性强,不适用于血液化验和生化测验。

    在进行血小板聚集功能检测时,选用3.8%枸橼酸钠作为抗凝剂。使用低浓度的枸橼酸钠抗凝剂(如3.2%的枸橼酸钠)更易引起血小板活化,导致血小板在检测前就已经聚集。

草酸盐

草酸盐也是常用的抗凝剂,优点是溶解度大,作用原理是溶解后解离的草酸根与标本中的Ca2+形成草酸钙沉淀,使Ca2+失去凝血功能,凝血过程被阻断。常用的草酸盐抗凝剂种类有草酸钠、草酸钾和草酸铵,草酸钠的常用浓度为O.1 mol/L,与血液按1:9比例使用。但是,高浓度k+Na+易使血细胞脱水皱缩,而草酸铵则可使血细胞膨胀,故测定血细胞比容时用草酸铵与草酸钾或草酸钠两者适当比例混合的抗凝剂,恰好不影响红细胞的形态和体积。常用于血液生化测定,但不适用于K+Ca2+的测定。由于生成草酸钙沉淀,红细胞会出现锯齿状,白细胞出现空泡,淋巴细胞及单核细胞会变形,不宜做血片检查。草酸盐可使血小板聚集,并影响白细胞形态,不能用于白细胞和血小板分类计数。

结语:

抗凝剂在实验室检查中很重要,随着相关研究的不断深入,对于实验室检查中的血液标本选择和抗凝剂的使用不断会有新的认识,要求检验工作者转变一律使用血清检测的传统观念,根据检测项目选用合适的抗凝剂,以便为临床提供正确有效的检测结果。

【参考文献】

[1] 薛俊太,邓翠华,袁问东等.实验室检验中抗凝剂的选择和使用[J].检验医学与临床.2009,6(8)633-640.

[2] 周伟青.抗凝剂在临床检验中的应用[J].现代中西医结合杂志.2006,1524):3403-3404.